A tandem tömegspektrométer és a Probe Electrospray Ionization (PESI) módszer kombinációja lehetővé teszi Everolimus és Abirateron komponensek kvantitatív vizsgálatát plazmából, közvetlenül a fehérjekicsapást követően.

Bevezetés

Az alacsony hatásos vérkoncentrációjú gyógyszerek, mint például az immunszuppresszánsok, nagy farmakokinetikai variabilitással rendelkeznek, és a terápiás gyógyszerek monitorozása szükséges a toxikus mellékhatások minimalizálása érdekében. Ezért a gyógyszerkoncentráció gyors és pontos mérése fontos a klinikusok számára, hogy időben és megfelelő kezelést végezzenek.

Mindazonáltal bonyolult előkezelésre van szükség a gyógyszerek vérben lévő komplex metabolitkomponensekként történő méréséhez. Ezért nehéz gyorsan megadni az elemzés eredményét.

Ebben a tanulmányban a PESI/MS/MS rendszer segítségével az Everolimus és az Abirateron gyors és egyszerű mennyiségi elemzése történik plazmából fehérjementesítést követően.

Módszer

Ehhez a kísérlethez kereskedelmi forgalomban kapható standard plazmát használták. 100 μL LCMS tisztaságú etanolt adtak 100 μL  plazmához, amely ismert mennyiségű Everolimust és Abirateront tartalmazott, majd ezt vortexeléssel összekeverték. A DPiMS méréshez 10 μL felülúszót használtak 10 000 g-mal végzett 5 perces centrifugálás után. A hármas kvadrupól tömegspektrométert (LCMS 8060, Shimadzu, Kyoto, Japán) PESI (Probe Electro Spray Ionization) egységgel (DPiMS-8060, Shimadzu, Kyoto, Japán) kötötték össze mint ionforrás.

Eredmények

Módszerfejlesztés Everolimus és Abirateron esetében

A PESI/MS/MS analitikai körülményeit Everolimus és Abirateron standard reagensek alkalmazásával vizsgáltuk 50% EtOH oldószerben oldva.

A tömegspektrométer pozitív ion üzemmódban működött, és többszörös reakciófigyelési (MRM) módban konfigurálták az Abirateron mennyiségének meghatározására (m/z 350 → 156). Az Abirateron metabolitjainak szűrésére a tömegspektrométert leányion–pásztázási módban működtették.

Az Abirateron leányionja m/z 170 és 156, 2,45 kV, CE-50,0 V ionizációs feszültség mellett, kvantitatív elemzéshez 156 m/z leányiont használtak, és m/z 170-et megerősítő ionként.

Az Everolimus esetében több addukt iont figyeltek meg a standard Q3 vizsgálat során. A leányion-pásztázás során az adduktionok között nagy ionintenzitású Na adduktot (m/z 980,8) állították be prekurzor ionként.

Bár az Evelolimus nagyon sok leányiont ad, a mennyiségi meghatározáshoz nagy ionintenzitású m/z 389,3-at használták.

Az Evelolimus és Abirateron mennyiségi elemzése a plazmában

Az Everolimus és Abirateron mennyiségi analízisét a plazmában az alábbi módszerrel érték el. A standarddal korábban már addícionált plazmához azonos térfogatban etanolt adtak, majd vortexeléssel összekeverték. A kicsapódott fehérjét centrifugálás segítségével távolították el, a kapott felülúszóból végezték el a mérést. Lineáris kalibrációt sikerült felvenni a 3-100 ng/mL tartományban a Everolimus esetében és 2-400 ng/mL Abirateron esetében. A relatív szórás a kvantitatív elemzési tartományon belül kevesebb, mint 20 RSD% volt, amely teljesítette az elégséges követelményeket. Ezenkívül az előkezelést is magában foglaló elemzési idő mintánként 10 percen belül, nagyon rövid idő alatt is lehetséges volt. A PESI ionoizációs technika nem érzékeny a mátrix okozta ionelnyomásra. Ezért, mint ebben az esetben, ha az oldatban nincs ugyanaz a m/z komponens, mint a célpontban, nem szükséges folyadékkromatográfiával vagy bonyolult előkezeléssel szétválasztani az ionizációt gátló mátrixkomponenseket. Amikor LC-MS/MS technikával elemezzük a plazmában lévő gyógyszer komponenseket, fehérjementesítési folyamatra van szükség, mert ez károsítja az oszlopot. Ezért előkészítési időre van szükség. Azonban a PESI/MS/MS rendszer alkalmazásával, a PESI technikával, amely az egyik közvetlen ionizációs technika, jelentősen lerövidíthető volt a mérési idő, beleértve az előkezelést is. Ezek az eredmények azt mutatták, hogy a PESI/MS/MS rendszer alkalmas a gyógyszerkomponens mérésére komplex mátrixokban.

Összegzés

Gyógyszerhatóanyag mennyiségi elemzése 10 percen belül sikeres volt plazmából.

PESI/MS/MS rendszer képes rövid idő alatt gyógyszerhatóanyagok mennyiségi mérésére bonyolult mátrixban.

 

Ha tetszett, oszd meg:

Regisztráció

Miért érdemes regisztrálnia?

  • hozzáférhet védett tartalmakhoz, applikációkhoz
  • feliratkozhat szakmai hírleveleinkre, melyekben értesítjük az Ön szakterületét érintő friss hírekről
  • igénybe veheti online support szolgáltatásunkat

addRegisztrálok

Friss tartalom

Az 1. rész leírja a mintaüvegek adszorpciójának mechanizmusait, és azt, hogyan csökkenthető ez az adszorpció kereskedelmi forgalomba hozott, alacsony adszorpciós fiolák (LabTotal Vial és TORASTTM-H Bio Vial) használatával. Az utóbbi időben számos kérés érkezett alacsony adszorpciós polipropilén (PP) pipettahegy (PP tip) kifejlesztésére. Ezek a kérések olyan felhasználóktól érkeznek, akik szabványos PP hegyeket használnak mintavételre, hígításra és minta-előkészítésre, és azt tapasztalták, hogy az adszorpció rontja az analitikai eredmények megbízhatóságát.

Ennek megfelelően, a TORAST-H Bio Vial fejlesztését folytatva, a Shimadzu a PP hegyekhez való adszorpciót is vizsgálta, és megkezdte egy alacsony adszorpciós PP hegy kifejlesztését, és a világon először forgalomba hozta a TORAST-H pipettahegyet. Ebben a részben bemutatjuk a PP hegyek adszorpciójának jelenségét, áttekintést adunk a TORAST-H Tipről, és ismertetjük annak adszorpciót csökkentő hatását.

Összefoglalónkkal szeretnénk rávilágítani a komponensek vialban történő adszorpciójának problémájára, lehetséges megoldására.

Az automata mintaadagolóval injektált minta kapilláris csöveken keresztül jut el a(z) (U)HPLC oszlophoz. Ha a mintaoldószer és a mozgófázis nem megfelelően keveredik amíg a minta eléri az oszlopot, a csúcs alakja torzulhat. A csúcs kiszélesedik, ha a mozgófázisnál nagyobb elúciós erősségű mintaoldószert használunk. Ez hatványozottan jelentkezik a kisebb belső átmérőjű csöveket alkalmazó UHPLC-rendszerek esetén.

A folyadék-folyadék extrakció (LLE), támogatott folyadék extrakció (SLE), és szilárd fázisú extrakció (SPE) technikák már évtizedek óta léteznek, és ha szerves minta-előkészítést végez, akkor legalább az egyik technikában már járatos. De ismeri-e mindegyik technikát? Miben hasonlóak? Miben különbözőek? Tekintse át ezt velünk!

A Shimadzu LC/MS/MS foszfolipid MRM-könyvtár két módszert tartalmaz: egyet a foszfolipidek osztályozására a biológiai minták fő foszfolipideinek átfogó elemzéséhez, a másikat pedig a zsírsavösszetétel meghatározására, amelyet az osztályozási módszerrel kapott analitikai eredmények felhasználásával hoztak létre. A könyvtár a 14-22 szénatomszámú zsírsavakat tartalmazó foszfolipideket célozza meg, és több mint 867 komponenshez tartalmaz MRM-átmeneteket. A könyvtár lehetővé teszi a foszfolipid profilalkotás elvégzését egy foszfolipid osztályozási módszerrel végzett kezdeti elemzéssel. Ezt követi egy módszer létrehozása a zsírsavösszetétel meghatározására az első analízis során kimutatott foszfolipidcsúcs alapján, majd ezt használva egy második elemzés elvégzése során a zsírsavösszetétel meghatározása történik meg.

A bomlásból származó hisztamin és tiramin, a hisztidin és a tirozin degradációjából keletkezik mikroorganizmusok hatására. Ha a lefogyasztott élelmiszerek, előre feldolgozott termékek, vörös húsú halak mint tonhal, bonito, makréla stb., nagy mennyiségű hisztamint tartalmaznak, akkor ételmérgezési tünetek jelentkezhetnek úgy mint láz, kiütések, szívdobogás. Az erjesztett élelmiszerekhez -mint bor vagy sajt- szintén kapcsolódhat hasonló jelenség. Ezenkívül a tiramin is erősítheti a hisztamin toxicitását, és az élelmiszerrel összefüggő migrén okozójaként jelentették.

Bár Japánban nincsenek speciális hisztaminnal kapcsolatos előírások, más országokban, beleértve az Egyesült Államokat és az EU-t, a hal- és halászati termékekre vonatkozóan a Codex (Nemzetközi Élelmiszer Szabványok) szabályozási határértékeit állapították meg. Mivel a tiramin és a hisztamin -az aminosavakhoz hasonlóan- aminocsoportot tartalmaz, a fluoreszcencia detektálása lehetséges az orto-ftal-aldehiddel (OPA) való derivatizálással. Itt bemutatunk egy példát a tiramin és a hisztamin elemzésére a Prominence Amino Acid Analysis rendszer segítségével, amelyben a detektálást oszlop utáni fluoreszcens származékképzéssel végezzük. Az ehhez az alkalmazáshoz rendelkezésre álló mozgófázis és reagens készlet tartalmazza a szükséges mozgófázisokat és reagenseket, így kiküszöbölik a mozgófázis előkészítésétéből adódó bizonytalanságot. Ezen kívül, mivel a minta előkezelése csak szűrést és hígítást tartalmaz ennél az alkalmazásnál, így az elemzés bonyolult feldolgozás nélkül is elvégezhető.

2021. szeptember 1-től a Simkon Kft. látja el a Biotage teljes körű képviseletét Magyarországon.

A tandem tömegspektrométer és a Probe Electrospray Ionization (PESI) módszer kombinációja lehetővé teszi Everolimus és Abirateron komponensek kvantitatív vizsgálatát plazmából, közvetlenül a fehérjekicsapást követően.

A megfelelő rendszerindítási folyamat: a HPLC rendszer ekvilibrálása és a specifikus rendszeralkalmassági teszt (SST) futtatása kritikus lépések az LC futtatások előtt azért, hogy biztosítsuk a magas adatminőséget (reprodukálhatóság, pontosság, stb.) és hogy csökkentsük a karbantartás költségeit, növeljük az oszlop élettartamát. Ezek a lépések időigényesek a felhasználó számára, de ha nem megfelelően végzi ezeket el, az adatromláshoz és a szükséges újramérés miatti időveszteséghez vezetnek. Ebben az összefoglalóban azt mutatjuk be, hogy a Shimadzu hogyan tudja automatikusan felkészíteni a készüléket a mérésre.

A sejttenyésztési folyamatok optimalizálása és ellenőrzése elengedhetetlen a biofarmakonok termelési hatékonyságának növeléséhez. A sejtterápia területén -beleértve a regeneratív gyógyászati eljárásokat is- különösen fontossá vált a tenyésztési folyamatok fokozott ellenőrzése, csökkentve ezzel a sejtek variabilitását és javítva a sejtek tömegtermelésének konzisztenciáját. Ezen célokra hasznos információt ad a kutatóknak a sejttenyészet felülúszó összetevőinek monitorozása. Jelenleg a tenyésztési folyamat felügyeletét pH méréssel, oldódó gázok és néhány komponens, pl.: glükóz, glutamin, laktát és ammónia mennyiségének mérésével végzik.