A folyadék-folyadék extrakció (LLE), támogatott folyadék extrakció (SLE), és szilárd fázisú extrakció (SPE) technikák már évtizedek óta léteznek, és ha szerves minta-előkészítést végez, akkor legalább az egyik technikában már járatos. De ismeri-e mindegyik technikát? Miben hasonlóak? Miben különbözőek? Tekintse át ezt velünk!

SPE – A szilárd fázisú extrakció

A szilárd fázisú extrakció olyan technika, ami úgy választja el a mintából az analitokat, hogy azt szilárd médián köti meg fizikai vagy kémiai adszorpcióval. A média szilárd anyag felületére van megkötve, ami lehet korong formájú vagy extrakciós csőbe van töltve. Ahogy a minta áthalad a szilárd fázison, az analitok megkötődnek a médián. Az analitokat ezután olyan oldószerrel kell lemosni, ami erősebb, mint a szilárd fázisra való kötődés ereje. Ezt az oldószert kell felfogni, ami így már tartalmazza a mérendő analitokat.

Tudjon meg többet a Biotage SPE termékekről és technikákról (kattintson rá).

SLE –A támogatott folyadék extrakció

A támogatott folyadék extrakció egy olyan technika, amely extrakciós csőbe töltött inert hordozót használ, hasonlóan a szilárd fázisú extrakcióhoz.

Ellentétben az SPE-vel, ahol a mátrix és az esetleges egyéb zavaró komponens áthalad a szorbens anyagon (nem visszatartott), az SLE inert anyagot használ, amely visszatartja a teljes mintát – mind az analitokat, mind a mátrix komponenseit. Az analitokat ezután szelektíven eluálják a töltetről, azzal nem elegyedő szerves oldószerrel, így a mátrix komponensei a tölteten maradnak. Ellentétben az SPE-vel, ahol a mintát az oszlopra töltik, és a mátrix a szorbensen keresztül a hulladékba áramlik, az SLE esetében a teljes mintát az extrakciós ágyra töltik. Ezért rendkívül fontos, hogy megbizonyosodjon arról, hogy olyan formátumot használ, amely elegendő kapacitással rendelkezik a teljes mintamennyiség elnyeléséhez. Egy nem elegyedő oldószer hozzáadásakor az analitok megoszlanak ebben az oldószerben, így emiatt ez a technika nagyon hasonló a folyadék-folyadék extrakciós technikához.

Nézze meg az alábbi videót az SLE extrakciós folyamat megtekintéséhez (kattinson rá).

Tudjon meg többet a Biotage SLE termékekről és technikákról (kattintson rá).

 

LLE – Folyadék-folyadék extrakció

A folyadék-folyadék extrakció olyan technika, amely egymással nem elegyedő oldószereket használ az analitok relatív oldhatóságuk alapján történő megoszlására. A minta és a vele nem elegyedő oldószer rázótölcsérben való rázatása során az extraháló oldószerbe migrálnak a mintából meghatározandó komponensek. Nyugalmi helyzetben a két oldószer szétválik, ezért fizikailag elválaszthatóak egymástól.

Ez a technika hasonló az SLE-hez, mivel vízzel nem elegyedő oldószereket használnak az analitok oldhatóságuk alapján történő megoszlására. Az SLE-vel ellentétben azonban a folyadék-folyadék extrakció erőteljes rázást igényel, amivel a szerves oldószer apró cseppekre bomlik, ami lehetővé teszi, hogy a vizes mintában lévő analitok a nagy érintkezési felületen keresztül átjussanak az extraháló oldószerbe, amihez nagyobb affinitásuk van, azaz amiben jobban oldódnak. Ezután a két fázis elválasztható.

Az egymással nem elegyedő oldószerek felrázásának hátránya (amellett, hogy ez egy nagyon manuális és időigényes folyamat), hogy ezeknek az apró cseppeknek a képződése emulziót eredményezhet, amelynek felbomlása sok időt és oldószert igényel. Ennek a technikának egy másik hátránya, hogy nagyon nehéz automatizálni, és általában a mintákat sorrendben, nem pedig párhuzamosan lehet feldolgozni, ami csökkenti az egy nap alatt feldolgozható minták számát, így az előkészítés áteresztőképességét.

Összegzés

Mind az SPE, mind az SLE automatizálható technikák, és mindkettő megakadályozza az emulziók képződését. Az SPE és az SLE esetében sem kell rázást alkalmazni, továbbá az analitot szorbens anyagon lehet tartani az extrakciós oldószer bevezetése előtt. A vizes minta a vízzel nem elegyedő oldószer bevezetése előtt már a szennyesbe jut.

Mint látható, van némi hasonlóság az SPE, SLE és LLE technikák között, de van néhány lényeges különbség is. Ezen különbségek miatt az egyik technika alkalmasabb egy adott alkalmazáshoz, mint a másik technika.

További alkalmazási és technikai tippekért kattintson a hivatkozásra.

Ha tetszett, oszd meg:

Regisztráció

Miért érdemes regisztrálnia?

  • hozzáférhet védett tartalmakhoz, applikációkhoz
  • feliratkozhat szakmai hírleveleinkre, melyekben értesítjük az Ön szakterületét érintő friss hírekről
  • igénybe veheti online support szolgáltatásunkat

addRegisztrálok

Friss tartalom

Az 1. rész leírja a mintaüvegek adszorpciójának mechanizmusait, és azt, hogyan csökkenthető ez az adszorpció kereskedelmi forgalomba hozott, alacsony adszorpciós fiolák (LabTotal Vial és TORASTTM-H Bio Vial) használatával. Az utóbbi időben számos kérés érkezett alacsony adszorpciós polipropilén (PP) pipettahegy (PP tip) kifejlesztésére. Ezek a kérések olyan felhasználóktól érkeznek, akik szabványos PP hegyeket használnak mintavételre, hígításra és minta-előkészítésre, és azt tapasztalták, hogy az adszorpció rontja az analitikai eredmények megbízhatóságát.

Ennek megfelelően, a TORAST-H Bio Vial fejlesztését folytatva, a Shimadzu a PP hegyekhez való adszorpciót is vizsgálta, és megkezdte egy alacsony adszorpciós PP hegy kifejlesztését, és a világon először forgalomba hozta a TORAST-H pipettahegyet. Ebben a részben bemutatjuk a PP hegyek adszorpciójának jelenségét, áttekintést adunk a TORAST-H Tipről, és ismertetjük annak adszorpciót csökkentő hatását.

Összefoglalónkkal szeretnénk rávilágítani a komponensek vialban történő adszorpciójának problémájára, lehetséges megoldására.

Az automata mintaadagolóval injektált minta kapilláris csöveken keresztül jut el a(z) (U)HPLC oszlophoz. Ha a mintaoldószer és a mozgófázis nem megfelelően keveredik amíg a minta eléri az oszlopot, a csúcs alakja torzulhat. A csúcs kiszélesedik, ha a mozgófázisnál nagyobb elúciós erősségű mintaoldószert használunk. Ez hatványozottan jelentkezik a kisebb belső átmérőjű csöveket alkalmazó UHPLC-rendszerek esetén.

A folyadék-folyadék extrakció (LLE), támogatott folyadék extrakció (SLE), és szilárd fázisú extrakció (SPE) technikák már évtizedek óta léteznek, és ha szerves minta-előkészítést végez, akkor legalább az egyik technikában már járatos. De ismeri-e mindegyik technikát? Miben hasonlóak? Miben különbözőek? Tekintse át ezt velünk!

A Shimadzu LC/MS/MS foszfolipid MRM-könyvtár két módszert tartalmaz: egyet a foszfolipidek osztályozására a biológiai minták fő foszfolipideinek átfogó elemzéséhez, a másikat pedig a zsírsavösszetétel meghatározására, amelyet az osztályozási módszerrel kapott analitikai eredmények felhasználásával hoztak létre. A könyvtár a 14-22 szénatomszámú zsírsavakat tartalmazó foszfolipideket célozza meg, és több mint 867 komponenshez tartalmaz MRM-átmeneteket. A könyvtár lehetővé teszi a foszfolipid profilalkotás elvégzését egy foszfolipid osztályozási módszerrel végzett kezdeti elemzéssel. Ezt követi egy módszer létrehozása a zsírsavösszetétel meghatározására az első analízis során kimutatott foszfolipidcsúcs alapján, majd ezt használva egy második elemzés elvégzése során a zsírsavösszetétel meghatározása történik meg.

A bomlásból származó hisztamin és tiramin, a hisztidin és a tirozin degradációjából keletkezik mikroorganizmusok hatására. Ha a lefogyasztott élelmiszerek, előre feldolgozott termékek, vörös húsú halak mint tonhal, bonito, makréla stb., nagy mennyiségű hisztamint tartalmaznak, akkor ételmérgezési tünetek jelentkezhetnek úgy mint láz, kiütések, szívdobogás. Az erjesztett élelmiszerekhez -mint bor vagy sajt- szintén kapcsolódhat hasonló jelenség. Ezenkívül a tiramin is erősítheti a hisztamin toxicitását, és az élelmiszerrel összefüggő migrén okozójaként jelentették.

Bár Japánban nincsenek speciális hisztaminnal kapcsolatos előírások, más országokban, beleértve az Egyesült Államokat és az EU-t, a hal- és halászati termékekre vonatkozóan a Codex (Nemzetközi Élelmiszer Szabványok) szabályozási határértékeit állapították meg. Mivel a tiramin és a hisztamin -az aminosavakhoz hasonlóan- aminocsoportot tartalmaz, a fluoreszcencia detektálása lehetséges az orto-ftal-aldehiddel (OPA) való derivatizálással. Itt bemutatunk egy példát a tiramin és a hisztamin elemzésére a Prominence Amino Acid Analysis rendszer segítségével, amelyben a detektálást oszlop utáni fluoreszcens származékképzéssel végezzük. Az ehhez az alkalmazáshoz rendelkezésre álló mozgófázis és reagens készlet tartalmazza a szükséges mozgófázisokat és reagenseket, így kiküszöbölik a mozgófázis előkészítésétéből adódó bizonytalanságot. Ezen kívül, mivel a minta előkezelése csak szűrést és hígítást tartalmaz ennél az alkalmazásnál, így az elemzés bonyolult feldolgozás nélkül is elvégezhető.

2021. szeptember 1-től a Simkon Kft. látja el a Biotage teljes körű képviseletét Magyarországon.

A tandem tömegspektrométer és a Probe Electrospray Ionization (PESI) módszer kombinációja lehetővé teszi Everolimus és Abirateron komponensek kvantitatív vizsgálatát plazmából, közvetlenül a fehérjekicsapást követően.

A megfelelő rendszerindítási folyamat: a HPLC rendszer ekvilibrálása és a specifikus rendszeralkalmassági teszt (SST) futtatása kritikus lépések az LC futtatások előtt azért, hogy biztosítsuk a magas adatminőséget (reprodukálhatóság, pontosság, stb.) és hogy csökkentsük a karbantartás költségeit, növeljük az oszlop élettartamát. Ezek a lépések időigényesek a felhasználó számára, de ha nem megfelelően végzi ezeket el, az adatromláshoz és a szükséges újramérés miatti időveszteséghez vezetnek. Ebben az összefoglalóban azt mutatjuk be, hogy a Shimadzu hogyan tudja automatikusan felkészíteni a készüléket a mérésre.

A sejttenyésztési folyamatok optimalizálása és ellenőrzése elengedhetetlen a biofarmakonok termelési hatékonyságának növeléséhez. A sejtterápia területén -beleértve a regeneratív gyógyászati eljárásokat is- különösen fontossá vált a tenyésztési folyamatok fokozott ellenőrzése, csökkentve ezzel a sejtek variabilitását és javítva a sejtek tömegtermelésének konzisztenciáját. Ezen célokra hasznos információt ad a kutatóknak a sejttenyészet felülúszó összetevőinek monitorozása. Jelenleg a tenyésztési folyamat felügyeletét pH méréssel, oldódó gázok és néhány komponens, pl.: glükóz, glutamin, laktát és ammónia mennyiségének mérésével végzik.